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艾森生物推出流式细胞仪新品 配备561nm激光器
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  • 发表时间:2016-11-18

艾森生物推出流式细胞仪新品 配备561nm激光器

 

随着流式细胞仪在细胞、蛋白和基因水平应用的不断扩展,以及许多新型单克隆抗体和荧光染料的发现,科研人员对于更多不同种类荧光染料的检测需求也越来越大。为了满足市场的这种需要,艾森生物在近期推出了配备有561nm激光器的2种新型流式细胞仪:NovoCyte 3000VYB405nm488nm561nm)和NovoCyte 3000RYB488nm561nm),具体配置如图1

 

1配备561nm激光器的流式细胞仪配置

 

配备561nm激光器的流式细胞仪具有以下特点:

1.高敏感性

PE系列的荧光素(如PEPETexas RedPECF594PECy5PECy5.5PECy7)可以被488nm561nm激光器激发。但相对于488nm来说,配备561nm激光器的NovoCyte 3000VYBNovoCyte 3000RYB激发效率更高,产生的荧光信号更亮,检测敏感性更好,阳性细胞和阴性细胞的分离度(染色指数,Stain Index)也更大(图2)。

 

2  561nm488nm激发PEPECy时荧光信号(AC)和染色指数(BD)的对比

561nm激发时产生的荧光信号(黄色)要明显高于488nm激发的信号(蓝色);561nm激发的染色指数也要高于488nm

 

2.低荧光泄露

FITC(或GFP)和PE是流式细胞仪上最常用的两种染料。由于发射光谱重叠(Overlapping Emission Spectra),它们被488nm激发时会产生荧光泄漏(spillover)。在配备561nm激光器的NovoCyte 3000VYBNovoCyte 3000RYB上,FITCPE分别被488nm561nm激光器激发,两个通道相对独立,因此二者间的荧光泄漏明显降低,有利于微弱信号的检测(图3)。

 

3  FITCPE488nm单独激发和488nm561nm独立激发时荧光泄漏的对比

488单独激发以及488nm561nm独立激发FITCPE时的散点图,可见单独激发时FITC渗漏至PE的荧光较多(左),而独立激发时荧光泄漏少(右))

 

3.有利于荧光蛋白的检测

荧光蛋白是检测蛋白表达和转染效率的重要工具。配备561nm激光器的NovoCyte 3000VYBNovoCyte 3000RYB可用于GFPmCherryDsRed等荧光蛋白的检测。561nm具有激发效率高、敏感性好等特点,在检测的荧光强度和染色指数方面明显优于488nm的激光器(图4)。

 

4在检测荧光蛋白DsRedmCherry时,561nm488nm激光器的对比。

(检测DsRed时,561nm荧光强度明显高于488nm(左);检测DsRedhemCherry时,561nm的分离度明显优于488nm(右))

 

4.实现科研应用的多色分析

使用配备561nm激光器的NovoCyte 3000VYBNovoCyte 3000RYB可轻松实现多种科研应用的多色分析,如4色、6色和8色的淋巴细胞亚群分析(图5、图6、图7)。

5配备561nm激光器的 NovoCyte 3000 VYB流式细胞仪使用4色试剂(CD3 FITC/CD8 PE/CD45 PerCP/CD4 APCCD3 FITC/CD16+CD56 PE/CD45 PerCP/CD19 APC)检测淋巴细胞亚群

PEAPC561nm激光器激发后检测)

 

图6配备561nm激光器的 NovoCyte 3000 VYB流式细胞仪使用6色试剂(CD3 FITC/CD4 PE/ CD45 ECD/CD8 APC/CD45RA APC-Cy7)检测淋巴细胞亚群

 

7配备561nm激光器的 NovoCyte 3000 VYB流式细胞仪使用8色试剂(CD4 FITC/CD19 PE/CD25 PE-Dazzle594/CD103 APC/CD8a APC-Cy7/NK-1.1 BV421/CD3 BV510)检测淋巴细胞亚群

(通过7AAD排除死细胞,PEPE-Dazzle594APCAPCCY7561nm激光器激发后检测)