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 RTCA 实时无标记细胞功能分析技术

Q: 实时无标记细胞功能分析技术?
A: 艾森实时无标记细胞功能分析技术整合了微电子技术、细胞生物学和分子生物学。技术的核心是微电子生物感应芯片,这些芯片整合在细胞培养板的孔中,使得细胞功能分析仪无需任何标记就可以实时检测活细胞的活性。实时无标记细胞功能分析仪可以简单、可靠地检测到细胞的参数,比如黏附力、伸展、生长、死亡, 甚至特异的形态改变。

Q: 实时无标记细胞功能分析仪是流动的血细胞计数器吗?
A: 不是。实时无标记细胞功能分析仪不需要标记,检测的是细胞群体的状态。它不像细胞计数器那样只能观测单个细胞的状态。实际衡量是微电子感应芯片与活细胞之间的相互作用。实时无标记细胞功能分析仪能准确地检测到微弱的电阻抗信号变化,这些电阻抗信号的变化反映细胞的状态。

Q: 实时无标记细胞功能分析仪衡量的什么?
A: 活细胞与检测板孔中微电极相互作用,产生电阻抗的改变,系统用我们自主开发的计算方法,将这些信号转化为特定的参数——细胞指数(Cell Index)。细胞指数很好地衡量了细胞的状态——生长、扩散、形状改变、死亡、应激等。细胞指数已经被多家杂志评论并采纳。

Q: 这些电阻抗信号是不是会以某种方式影响细胞?
A: 不会。RTCA的检测电压为22mV,而通常的细胞生物电可以达到70mV。同时,我们的大量验证实验也证明了电场对细胞及检测没有影响。

Q: 实时无标记细胞功能分析仪是否耐用,特别是培养器皿内的工作台?
A: 实时无标记细胞功能分析仪安置在培养器皿内的组件是特异设计的,能够耐实验室培养器皿内的高温和潮湿。

Q: RTCA技术有没有已发表的参考文献?
A: 有。ACEA RTCA 技术全球近3000个用户,目前基于RTCA技术发表的文献近600篇,详见官网下载中心文献列表。

Q: 检测细胞活性,RTCA技术与传统的MTT方法有什么不同?
A: MTT实验是典型的终点检测细胞增殖毒性的方法,缺点是只能实现单点检测,需要标记,并且实验繁琐。使用MTT方法,得到的细胞在增殖及死亡信息非常单一,细胞变化进程中的信息完全被遗漏掉。RTCA完全可以替代MTT,不仅大大简化实验流程,可以提供了细胞活性变化的实时动态信息,这对于基于细胞增殖实验的药物、病毒、细菌毒素及细胞因子的作用检测非常有优势。

Q: RTCA技术与高内涵及活细胞工作站的区别?
A:RTCA技术将细胞的各种状态模拟成了一根曲线,更加的直观,相比活细胞工作站能同时检测更多的样本量,检测实时,且检测时间更灵活,操作更加方便,无需标记,能保证细胞的真实状态。

Q: 如何把实时无标记细胞功能分析仪引进到现有的实验室?
A: 实时无标记细胞功能分析仪带给客户很多便利。该细胞分析仪设计简洁,安装条件低,操作过程无需任何标记。同时该细胞分析仪实时提供客户动态的实验数据,大大丰富了用户对细胞响应外界刺激(添加荷尔蒙,药物等)的认识。该细胞分析仪可以对上百小时的整个实验进行全程的检测,还可以根据客户需要提供与时间相关的数据,这是传统的检测方法所无法实现的。我们相信这种实时的不间断的检测特点对客户有着非常重要的意义,且在很大程度上帮助客户更合理的设计后期实验。

Q: 什么是实时分析,和传统的分析有什么不同?
A: 实时分析意指细胞的行为或状态能以规则或不规则的间隔连续检测。对细胞行为、细胞反应或细胞状态的检测和数据记录或显示可以在几秒或几分钟的时间内完成。一次检测中,细胞的反应可以在选定的时间范围内连续检测。比如,培养的在检测板中的细胞在加入一种试剂后可以以5到15分钟的间隔连续检测几个小时或者数天。无论是规则还是以不规则的时间间隔检测阻抗以及检测阻抗的持续时间都可以由实验者本身决定。因而,该细胞分析仪基于细胞阻抗的检测方法避免了由于时间点或者样本或细胞分析选择的时间点的局限造成的难以注意到的偏差。另外,检测不需要额外准备细胞样本或者添加试剂,从而可以更方便、更快地得到结果,同时消除了这些过程中可能引入的错误。

RTCA E-Plate 实时细胞检测板

Q: 实时无标记细胞功能分析仪可否拍摄细胞?
A: 可以。细胞的图片可以由检测板和显微成像系统获取。

Q: E-plate可否用在平板读取器上?
A: 实时无标记细胞功能分析仪是设计成标准微板尺寸的,可以与大多数微板吸量管和微板处理系统兼容。艾森自主设计的细胞电子检测板(E-Plate)需要在艾森实时无标记细胞功能分析仪上使用。

Q: 细胞在E-plate检测板上的生长与在标准细胞培养基质上的生长有什么不同?
A: E-plate检测板使用生物兼容的材料制成,生产的时候就经过组织培养处理。它们是无菌、一次性使用的耗材。细胞在E-plate检测板上的生长与绝大多数标准细胞培养板上的生长本质相同。

Q: E-plate检测板可以重复使用吗?
A:跟传统细胞培养板一样,他们是不重复使用的。

Q: E-plate检测板可以用不同的基质处理吗?
A: 可以。平板可以用任意基质,比如多聚赖氨酸或纤粘连蛋白等覆盖,以加强或者防止细胞黏附。

Q: 当我可以购买便宜的塑料平板并获得一样结果的时候,为什么我要使用: E-plate检测板?相对于标准滴定板技术,为这个系统的付出的成本是否值得?
A:艾森提供用户很多节省的机会。第一,该细胞功能分析仪不需要昂贵的标记,也不需要昂贵的光学系统。这对于大多数实验室来说都是很大的节省。第二,因为E-plate检测板连续自动地读取,劳动力需求就大大减少了。实验过程可以获取大量完整的生物学信息,而现行的系统是不可能完成的。

Q: 细胞如何黏附在微孔底部?
A: 细胞黏附在微孔底部平坦的微金电极上,这些微金电极覆盖底部75%的表面。实时无标记细胞功能分析仪的所有组件都是非生物排斥的,: E-plate检测板经过消毒和组织培养处理。艾森广泛的质量控制过程保证用户使用: E-plate检测板实验结果的一致性。

Q: 不同孔的测量是独立的吗?
A: 是的,每个孔都是采取有序的方式独立测量的。因为实时无标记细胞功能分析仪检测的相当于是所有微孔底部表面,另外,孔与孔之间的精度和准确度也很高。在我们实验室,我们通常能够获得孔与孔之间CV(变异系数)小于10%。 

数据分析和应用

Q: 细胞指数(Cell Index)表示什么意思?
A:细胞指数是一个无量纲的参数,由RTCA测得的阻抗值通过标准公式推算获得。细胞指数指示检测孔中的细胞活性,做为细胞表型的综合检测指标,细胞指数的变化反映了细胞的数目、形态、粘附及大小的综合变化。由于每个检测孔分布的位置不同,阻抗值的检测也有一定的差异,由阻抗值推算的细胞指数可以去除阻抗的本底差异,保证细胞指数反映的是检测细胞的活性和状态。细胞指数所记录的内容包括细胞的数目,细胞的大小,细胞的贴壁状态等方面的内容,包含了比细胞数目更加丰富的信息细胞指数受细胞数、细胞形态、培养细胞黏附力的影响。这个指标以动态曲线的形式展现给用户。细胞指数与动力学或时间指标相结合,提供给用户通常情况下不能获取的信息。在这些动力学导出的曲线中有很多有价值的信息。换句话说,它提供用户大量重要信息,这些信息是通常的“终点法”检测所不能获得的。

Q: 如何区别形态上的改变和细胞数量上的改变?
A: 实时无标记细胞功能分析仪得到的是随时间变化的曲线,提供孔内 的细胞动力学变化有价值的信息,形态变化产生的曲线与细胞数量变化产生的曲线会明显不同:细胞形态的改变短时间内很快发生,而细胞数目的变化发生所需时间较长。

Q: 关于科研实验结果,得到实验图片是不是要比得到曲线的结果更好?怎么解释?
A:得到实验图片是比较直观的结果,但是不能很精确的定量,而曲线数据除了可以直观地看到细胞的生长趋势外,还能更加精确的进行定量,因此对科研实验具有更加广泛的用途。

Q: 实时无标记细胞功能分析仪给出的是细胞状态的普通信号,如何确定特殊的生物学功能?
A: 实时无标记细胞功能分析仪适用于很多实验设计。举个例子,用传统的激动剂/拮抗剂方法可以获得大量信息,产生典型剂量反应曲线。如果用户需要,结合时间参数可以提供额外的动力学信息。对这些动力学信息进行进入挖掘,可以为户提供更多的信息。

Q: 实时无标记细胞功能分析仪上,哪些细胞系已经测试过,哪些没有?
A: 我们已经测试了几百种ATCC来源的细胞系,包括一些原始细胞。绝大部分黏着细胞可以在实时细胞电子检测分析系统上测试。而非黏着细胞不能直接测量。但是这在特定的实验中,这可能还能带来好处,特别是自然杀伤细胞介导的细胞毒素。

Q: 谁是你们的客户,他们的应用你们的细胞功能分析仪做什么?
A: 我们在药企、高校和政府机构等部门有着广泛的客户群。我们的客户将实时实时无标记细胞功能分析技术应用在很多地方,包括细胞增殖、细胞毒性、细胞黏附力、酪氨酸激酶受体信号转导、G蛋白偶联受体信号转导、RNA干扰功能分析、自然杀伤细胞活性、抗体依赖细胞介导性细胞杀伤(ADCC)、病毒CPE检测、病毒中和抗体检测和细胞毒素中和抗体检测。