xCELLigence免疫试剂盒

肿瘤免疫治疗的前景与挑战

免疫系统效应细胞对靶细胞的高特异性和有效的细胞杀伤能力,使其成为治疗血液肿瘤的最有希望的药物之一。 虽然被证明有效的细胞介导的免疫疗法种类不断增加,但想要实现该领域的临床治疗潜力还将需要:(1)继续阐明和验证癌细胞识别和免疫细胞介导杀伤的机制,(2)更高效的细胞治疗“药物”筛选能力:使用来自患者的免疫细胞(效应细胞)和/或肿瘤细胞(靶细胞)的免疫疗法构建最佳治疗方案。 xCELLigence RTCA实时无标记细胞分析技术能够很好的为上述两者提供在体外条件下定量检测免疫细胞介导的杀伤靶癌细胞的能力评估。 然而传统的细胞治疗杀伤评估方法存在缺陷,使它们无法有效地满足这种需求。

 

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传统细胞杀伤测定方法的不足

 

免疫细胞介导的靶细胞杀伤,是通过测量效应细胞的激活或其细胞毒性分子(穿孔素,酶等)的分泌来研究。虽然这些读数确实有用,但它们不一定与靶细胞杀伤效率相关 - 这是细胞治疗杀伤能力评估的最终量度。传统检测方法集中于检测靶细胞溶解后先前添加的标记(例如Cr51或荧光染料)或内源性生物分子(GAPDH,LDH等)的释放。除了与使用外源性标记相关的假阳性信号之外,这些标记检测的时间范围非常狭窄(外源标记物会被靶细胞排出到细胞外),且检测灵敏度低,通量低,以及仅产生单一时间点数据。

使用xCELLigenceRTCA开展靶向血液肿瘤的免疫疗法杀伤能力检测的优势

ACEA xCELLigence实时无标记细胞分析系统(RTCA)利用嵌在微金电极检测板底部的微金电极以非侵入性的方式检测贴壁细胞的状态。能够获得的分析参数包括细胞数量变化趋势,细胞大小/形状和细胞基底附着强度。尽管血液肿瘤细胞是悬浮细胞,但可以通过ACEA公司开发的B淋巴瘤细胞粘附试剂盒将血液癌细胞固定在板子底部。在暴露于各种免疫疗法(NK细胞,T细胞,CART,溶瘤病毒,检查点抑制剂等)后,靶细胞应答被xCELLigence仪器自动记录,如下文所示。该技术的主要突出特点包括更高的灵敏度,无标记,更简化的工作流程,最为重要的是连续动态测量效应细胞对血液肿瘤细胞的杀伤动力学过程。

 

 

 

步骤1:将目标血液肿瘤癌细胞最初接种在E-Plate板的检测孔中。细胞与微金电极的相互作用阻碍了电极之间的电流流动,从而产生一个阻抗的变化值。这个阻抗的变化值被称作“细胞指数”的无单位参数,该细胞指数随着细胞增殖而增加,然后在细胞接近100%融合时到达峰值(细胞达到增殖平台期)。
步骤2:随后加入免疫细胞,悬浮的免疫细胞(效应细胞)不会引起微金电极自身阻抗变化。
步骤3:如果效应细胞诱导靶细胞的杀伤,则可以灵敏且精确地检测到这种细胞杀伤过程。连续采集E-Plate板每个孔的阻抗数据,可以同时生成实时动力学曲线。

 

主要优点:

1.无标记:允许更多的生理测定条件;无需标记或二次测定。
2.实时:瞬时(分钟)和长时程(天)杀伤动力学的定量检测。
3.高检测灵敏度:能够评估低效应细胞对靶细胞的杀伤作用。
4.简化的工作流程:只需要添加效应细胞到靶细胞(存在或不存在抗体)。均质测定,无需额外样品处理。
5.自动数据绘图:RTCA软件能够轻松实现大容量数据收集和客观而灵活的数据分析,排除基于成像检测常见的主观数据审查。

 

ACEA开发了三套基于血液肿瘤细胞的特异性粘附试剂盒,可用于评估针对不同类型血液肿瘤的免疫杀伤评估实验。

 

Kit Name Tethering Reagent Validated Effector Cells Validated Target Cells
B细胞杀伤试剂盒(抗CD 40) anti-CD40 NK-92
TALL-104
CAR-T
primary CD8+ T cells
Daudi
Raji
Ramos
primary B cells
B细胞杀伤试剂盒(抗CD 19) anti-CD19 NK-92
primary CD8+ T cells
Raji
primary B cells
白血病细胞杀伤试剂盒(抗CD 29) anti-CD29 NK-92* K562